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知識天地

評估「臺糖糖適康(粉末食品)」之不易形成 體脂肪功能試驗

2019.04.23

前言 

根據(jù)世界衛(wèi)生組織(World Health Organization, WHO) 的定義,超重(overweight) 或 肥胖(obesity) 系指人體內(nèi)脂肪過度堆積而對 健康造成風(fēng)險。身體質(zhì)量指數(shù)(body mass

index, BMI)可作為評估個人是否出現(xiàn)超重或 肥胖的指標(biāo),其計算方法系將個人的體重除 以其身高的平方。 根據(jù)WHO的標(biāo)準(zhǔn),當(dāng)BMI達到或超過 30,即可認定為肥胖;當(dāng)BMI達到或超過25 則可判定為超重。超重或肥胖為許多慢性疾 病之危險因子,例如糖尿病、心血管疾病及 癌癥等。過去認為此一現(xiàn)象主要發(fā)生在高收 入國家,但是隨著城市化的腳步,低、中收 入國家人民出現(xiàn)肥胖或超重的情形已有急劇上升之趨勢,而在行政院衛(wèi)生福利部針對國 人死因的統(tǒng)計結(jié)果中發(fā)現(xiàn),在國人前十大死 因排名中與肥胖相關(guān)的疾病就占了一半以上, 例如心臟病、腦血管疾病與糖尿病等,因此 體重控制已成為健康管理的一項重要課題。 肥胖癥又可分為單純性肥胖(simpleobesity) 與續(xù)發(fā)性肥胖(secondary obesity),而單純性 肥胖又可再細分為體質(zhì)性肥胖與獲得性肥胖 兩種。單純性肥胖是指無明顯的內(nèi)分泌與代 謝性疾病之病因所引起的肥胖,屬于非病理 性肥胖癥,主要是和遺傳、飲食過量、運動 不足等不良生活習(xí)慣有關(guān),而有95%的肥胖 者都屬于此類型。其中,體質(zhì)性肥胖是指脂 肪數(shù)目過多所引起的肥胖癥,常見于兒童時 期;而獲得性肥胖則是脂肪細胞增大所引起 的肥胖,常見于成年時期。相反的,續(xù)發(fā)性 肥胖則是因內(nèi)分泌或代謝性疾病等所引起之 肥胖癥,例如甲狀腺低能癥、庫欣氏癥、下 視丘疾病等,因此又稱為癥狀性肥胖(symptomatic obesity),而此類型之肥胖癥通常針對 病因加以改善與治療,就能獲得良好改善[2]。 臺糖糖適康(粉末食品)由難消化麥芽 糊精、南瓜萃取物、苦瓜萃取物等三成分組 成。難消化麥芽糊精(resistant maltodexrin, Fibersol-2)為玉米淀粉經(jīng)鹽酸、加熱處理、 -amylaseglucoamlase水解后得到的產(chǎn)品。 難消化麥芽糊精中約有90%是水溶性膳食纖 維,大部分的水溶性纖維為高黏性的纖維, 被認為是可降低血糖及血脂。目前應(yīng)用于添 加飲料、乳品、酒類、代餐包及錠狀膠囊狀 食品等。過去相關(guān)動物研究顯示,攝取難消 化麥芽糊精能降低血漿總膽固醇、降低血漿 三酸甘油酯濃度、減緩高血糖及高胰島素癥 狀、降低體脂肪堆積等功能[3,4]。體脂肪與難 消化麥芽糊精相關(guān)功能性研究指出:(1) 23%脂肪加煉乳之飼料配比可作為有效誘發(fā) 高脂之實驗?zāi)J?,利用此模式可有效評估水 溶性膳食纖維配方之不易形成體脂肪之潛在功效[5]。(2)喂食高油脂之實驗?zāi)な?,?shù)據(jù)顯 示長期服用難消化麥芽糊精可顯著減少長期 的體重增加以及脂肪累積,特別是對于附睪 部位的臟器脂肪以及鼠蹊部的皮下脂肪有明 顯的功效[6](3)用餐時人體攝取難消化麥芽 糊精 Fibersol-2可減少饑餓感及增加賀爾蒙 而有飽足感[7]。綜合上述得知:難消化麥芽 糊精具有不易形成體脂肪之功能。 苦瓜(Momordica charantia),屬于葫蘆 科(Cucurbitaceae),是亞洲人民日常食用蔬 菜?,F(xiàn)今許多研究指出苦瓜具抗腫瘤、抗病 毒、抗發(fā)炎、降血糖、改善飲食誘導(dǎo)的肥胖 或降血脂等作用[8]。動物試驗方面,研究指 出苦瓜具顯著降低小鼠附睪脂肪組織和內(nèi)臟 脂肪的重量以及降低游離脂肪酸[8],而 HuiLing Huang 等人[9]研究結(jié)果證實,苦瓜具抗 胰島素抗性與抗糖尿病藥物thiazolidinedione (TZD)同樣效果,同時有效抑制內(nèi)臟脂肪堆 積并抑制脂肪細胞肥大。此外,苦瓜籽油可 降體脂、活化PKA傳訊、改變肝臟與脂肪組 織脂質(zhì)代謝[10,11]。 南瓜(Cucurbita moschata)屬于葫蘆科 (Cucurbitaceae)南瓜屬(Cucurbita),為一年 生草本蔓性植物,成份含豐富醣類與纖維質(zhì)、 少量蛋白質(zhì)及脂質(zhì),及多種維生素等。在動 物實驗中指出可些微降低了肝脂數(shù)、總膽固 醇及三酸甘油脂并能夠有效控制第二型糖尿 病小鼠血糖[12]。國外研究指出,水萃南瓜莖 部具有顯著抑制小鼠體重、脂肪重且不影響 攝食總量,也降低血清中三酸甘油酯和膽固 醇[13]。
試驗?zāi)康?span lang="EN-US">
雖然過去之研究顯示難消化麥芽糊精、 苦瓜與南瓜3 種成分有改善血脂或體脂的效 果,但對于此3 種成分的合并效果則尚未有 文獻報導(dǎo)。本試驗系依據(jù)衛(wèi)生福利部所公告 之「健康食品之不易形成體脂肪保健功能評估方法 (2013)[1]進行試驗。試驗期間,選 用誘發(fā)動物肥胖模式,每日投予高熱量飼料 及試驗物質(zhì),并利用各種測定指標(biāo),以評估 試驗物質(zhì)「臺糖糖適康(粉末食品)」(由 難消化性麥芽糊精、南瓜萃取物與苦瓜萃取 物組成。外包裝之標(biāo)裝標(biāo)示的含難消化糊精 之總膳食纖維含量相當(dāng)于75±15%)是否具 有不易形成體脂肪之功能。

材料與方法
試驗動物 60只雄性Sprague-Dawley (SD) 品系大 鼠,由樂斯科生物科技股份有限公司提供, 經(jīng) 7 天檢疫及環(huán)境適應(yīng)期,檢疫期間,每天 由試驗人員進行臨床觀察以確保動物之健康 狀況無任何異常才可進行試驗,所有大鼠系 以 2 只一籠的方式飼養(yǎng)于飼育籠中,以水瓶 方式提供充分經(jīng)高溫高壓滅菌之逆滲透水, 飼育房溫度范圍為22±3℃,濕度范圍為 55±15%,并以12小時為光暗周期進行飼養(yǎng)。 本動物試驗經(jīng)臺美檢驗科技有限公司實驗動 物照護及使用委員會審查同意執(zhí)行。
試驗設(shè)計 試驗期間,連續(xù)8 周使用高熱量飼料喂 食陰性對照組、低劑量組、中劑量組與高劑量組之大鼠,參考Chen等人(2008)的研究配 制飼料法[14],以 Rodent Laboratory Chow 5001商業(yè)成鼠飼料為基礎(chǔ),添加 26.7% 酥 油粉末,最終之脂肪重量比為20.0 g/100 g, 每百公克熱量為455.6 Kcal/100 g。正常對照 組大鼠則以Rodent Laboratory Chow 5001 商 業(yè)成鼠飼料進行喂食,其每公克熱量為3.36 kcal/g。各組試驗大鼠皆采任食之方式進行 飼育。 依據(jù)委托單位所提供試驗物質(zhì)之成人每 日建議攝取量為4.0 g。試驗劑量設(shè)計為2.0 g、4.0 g 8.0 g,設(shè)置3 組試驗組分別為低 劑量組、中劑量組與高劑量組,以大鼠相對 人體代謝系數(shù)6.2進行換算,大鼠每日攝取 量各約為0.21 g/kg、0.41 g/kg 0.83 g/kg, 投予劑量約為每日人體建議口服劑量的0.5 倍、1 倍及2 倍。 試驗物質(zhì)配制:去除外包裝秤取試驗物 質(zhì),每日由試驗人員配制,使用喂食針將對 照物質(zhì)或試驗物質(zhì)管喂投予試驗大鼠,限當(dāng) 天使用。正常對照組及陰性對照組則每日管 喂投予逆滲透水,投予劑量為10 mL/kg。試 驗物質(zhì)之大鼠投予劑量系依據(jù) FDA 公式[15] (每日建議量 g/60 kg×6.2)進行換算,計 算后各組試驗物質(zhì)喂食劑量如下表所示詳細 分組如下表所示:





檢測項目
體重及體重改變量 管喂試驗物質(zhì)前,秤取每只大鼠之體重。 試驗期間,每周進行秤重一次。將所測得大 鼠第8 周體重扣除其試驗前體重即可得知試 驗期間各組大鼠體重改變量(body weight change)。攝食量、總攝食量、總攝取熱量與 食物利用率 試驗期間每周結(jié)算大鼠攝食量1 次。于 秤取大鼠體重當(dāng)日加入定量飼料,并在1 周 后進行結(jié)算。加總8 周所測得之?dāng)z食量即可 獲得各組大鼠試驗期間之總攝食量(total feed intake)。以各組大鼠之總攝食量乘上飼料所 含熱量即可得知總攝取熱量(total energy intake)。試驗結(jié)束時,根據(jù)各組大鼠試驗期間 飼料總攝取量計算食物利用率(feedefficiency), 計算公式如下所示:
食物利用率=〔體重總增重量 (g) ÷飼料總攝取量 (g)〕×100%
血清生化檢查 試驗結(jié)束時,使用吸入二氧化碳方式將 所有試驗大鼠進行犧牲,并以心臟采血方式 采集每只大鼠之血液樣本。經(jīng)4℃、3000 x g 條件下離心15分鐘,取得血清并以血清生化 分析儀(7070 Autoanalyzer, Hitachi)及相關(guān)試 劑檢測血清樣本中之麩胺酸苯醋酸轉(zhuǎn)胺基酵 素(aspartate aminotransferase, AST)、麩胺 酸丙酮酸轉(zhuǎn)胺基酵素(alanine aminotransferase, ALT)、肌酸酐(creatinine)、尿酸(uric acid, UA)、葡萄糖(glucose)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、三酸甘油酯(triglyceride, TG)、 游離脂肪酸(free fatty acid, FFA)、高密度脂 蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇量(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、鉀離子(potassium)及鈉離子(sodium)

 

肝臟脂肪分析 依據(jù) Folch 等人之方法[16]進行肝臟脂質(zhì) 之萃取。秤取0.5 g肝臟,加入相當(dāng)于肝臟重 量 20倍的Folch reagent(氯仿:甲醇 =2 1V/V)進行肝臟脂質(zhì)萃取,在冰浴中以組 織均質(zhì)機將肝臟組織磨碎,經(jīng)隔夜萃取后以 Whatman No.1濾紙過濾,將濾液體積定量 至 10 mL 后收集于玻璃試管中,4℃冷藏保 存以供肝臟脂質(zhì)分析。 三酸甘油酯分析取0.1 mL肝臟萃取液于 微量離心管中,置于抽氣柜吹干,使溶劑自 然完全揮發(fā)后,再以市售檢測套組(TR213, RANDOX, Crumlin, UK)進行檢測,利用分 光亮度計(EpochTM, BioTek)測定其在500 nm 波長下之吸光值,并換算其三酸甘油酯之含 量。 總膽固醇含量分析取0.5 mL肝臟萃取液 于微量離心管中,置于抽氣柜吹干,使溶劑 自然完全揮發(fā)后,再以市售檢測套組(CH201, RANDOX)進行檢測,利用分光亮度計(Epoch TM, BioTek)測定其在500 nm 波長下之吸光 值,并換算其總膽固醇之含量。
體脂肪量與體脂肪率 試驗大鼠經(jīng)犧牲后,取其附睪周邊脂肪 (epididymal fat, EPI)、腎臟周邊脂肪(retroperitoneal fat, RET)、腸系膜脂肪(mesenteric fat, MES)秤重并計算其體脂肪量,計算公式 如下所示:
體脂肪量=附睪周邊脂肪+腎臟周邊脂肪 +腸系膜脂肪 體脂肪率=〔體脂肪量 (g)/體重 (g)〕×100%
數(shù)據(jù)整理與分析 實驗數(shù)據(jù)以平均值(mean)及標(biāo)準(zhǔn)偏差(standard deviation, S.D.)表示。大鼠體重、攝食 量、體重總增重量、總攝食量、總攝取熱量、
食物利用率、血清生化檢查與體脂肪率等數(shù) 據(jù),皆利用 SPSS 統(tǒng)計軟件中單因子變異數(shù) 分析(One-Way ANOVA) Duncan檢定法分 析各組別間數(shù)據(jù)之差異性,以英文字母表示 統(tǒng)計之結(jié)果,相同字母表示組間不具統(tǒng)計上 差異(p > 0.05),不相同字母表示組間具統(tǒng)計 上差異 (p < 0.05)
結(jié)果
體重及平均攝食量 試驗期間各組大鼠體重變化如表1所示。 試驗結(jié)果顯示陰性對照組大鼠經(jīng)喂食高熱量 飼料2 周后,其體重與正常對照組相比較呈 現(xiàn)顯著增加之情形(p < 0.05)。試驗結(jié)束時, 陰性對照組大鼠體重與正常對照組相比較呈 現(xiàn)顯著增加(p < 0.05)顯示大鼠被成功誘發(fā)出 肥胖癥狀,此外,中、高劑量與陰性對照組 相較下呈現(xiàn)顯著減少之情形(p < 0.05),而低 劑量與陰性對照組相比較無顯著差異(p > 0.05)。 試驗期間各組大鼠平均攝食量如表2 所 示。試驗結(jié)果顯示,試驗第2 8 周,正常 對照組大鼠平均攝食量均顯著高于陰性對照 組及3 組劑量組(p < 0.05);第1 8 周之3 組劑量組大鼠平均攝食量與陰性對照組相比 較無顯著差異 (p > 0.05)。
體重改變量、總攝食量、總攝取熱量及食物利 用率 試驗結(jié)束時,分別計算各組大鼠試驗期 間體重改變量,其結(jié)果如表3、圖2 所示。 與陰性對照組大鼠相比較,中、高劑量組大 鼠之體重改變量顯著降低(p < 0.05),其中、 高劑量組之體重改變量下降的幅度分別達到 8.7% 12.1%。 各組大鼠試驗期間總攝食量及總攝取熱 量之結(jié)果如表3 所示。試驗結(jié)果顯示,總攝 食量方面,陰性對照組及3 組劑量組相較下無顯著差異(p > 0.05)??倲z取熱量方面,正 常對照組大鼠則顯著低于陰性對照組及3 組 劑量組(p < 0.05)。 各組大鼠食物利用率之計算結(jié)果如表3 所示,中、高劑量組與陰性對照組相比較則 有顯著下降之情形(p < 0.05)。
血清生化安全性評估結(jié)果 各組大鼠血清生化檢測結(jié)果如表4所示。 肝功能指針方面,陰性對照組及3 組劑量組 大鼠血清 AST、ALT 濃度與正常對照組相 較,均無顯著差異(p > 0.05)。腎功能指針方 面,陰性對照組及3 組劑量組大鼠血清 Uric acidCreatinine濃度與正常對照組相比較, 皆無顯著差異(p > 0.05)。此外,各組間大鼠 血清鈉離子及鉀離子濃度亦均無顯著差異(p > 0.05),投予本試驗物質(zhì)對于3 組劑量組大 鼠之?dāng)z食量、肝腎功能、血液電解質(zhì)濃度及 血糖均無不良影響。 各組大鼠血糖檢測值均無顯著差異(p > 0.05)。血脂質(zhì)檢測方面,高劑量組大鼠之血 清游離脂肪酸(FFA)與陰性對照組相比,則具 顯著減少之差異(p < 0.05)。大鼠之血清高密 度脂蛋白膽固醇濃度(HDL-C),高劑量與陰 性對照組相比較,則顯著增加(p < 0.05),增 加的幅度為10.1%。血清低密度脂蛋白膽固 醇濃度(LDL-C),高劑量與陰性對照組相較 下,皆顯著減少(p < 0.05),血清低密度脂蛋 白膽固醇濃度下降的幅度為23.0%。中、高 劑量組大鼠之血清三酸甘油酯濃度及膽固醇 濃度與陰性對照組相較下,呈現(xiàn)顯著下降之 情形(p < 0.05),血清三酸甘油酯濃度之下降 幅度分別為15.2% 21.2%;膽固醇濃度之 下降幅度分別達到7.4% 9.6%。
各組內(nèi)臟脂肪量、體脂肪量、體脂肪率 試驗結(jié)束時,將各組大鼠行犧牲后進行 解剖,取大鼠附睪周邊、腎臟周邊及腸系膜
之內(nèi)臟脂肪進行秤重,其測得數(shù)據(jù)如表5 所 示。根據(jù)試驗結(jié)果,陰性對照組大鼠之附睪 周邊、腎臟周邊、腸系膜脂肪量及體脂肪量 (附睪周邊、腎臟周邊及腸系膜脂肪量之加 總)均顯著高于正常對照組(p < 0.05)。與陰 性對照組相比較高劑量組大鼠之附睪周邊、 腎臟周邊、腸系膜脂肪量均呈現(xiàn)顯著下降之 情形(p < 0.05)。在體脂肪量方面如表5、圖 3 所示,與陰性對照組相較下高劑量組呈現(xiàn) 顯著減少之情形(p < 0.05),其體脂肪量減少 的幅度達到20.8%。 各組大鼠體脂肪率如表5、圖4 所示。 試驗結(jié)果顯示,陰性對照組大鼠之體脂率顯 著高于正常對照組(p < 0.05)。此外,與陰性 對照組相較下高劑量組大鼠之體脂肪率均呈 現(xiàn)顯著下降之情形(p < 0.05)。
肝臟之重量及肝臟脂質(zhì)分析結(jié)果 試驗結(jié)束大鼠犧牲時,秤取各組大鼠主 要臟器肝臟之重量,并進行統(tǒng)分析。結(jié)果如 表 6 所示,試驗組各組大鼠肝臟之重量與控 制組相比較,并無顯著差異(p > 0.05)。顯示 管喂投予試驗物質(zhì)并不會造成試驗大鼠肝臟 重量之差異。各組大鼠肝臟脂質(zhì)檢測結(jié)果如 表 6 所示,高劑量組大鼠之肝臟三酸甘油酯 濃度及膽固醇濃度與陰性對照組相較下呈現(xiàn) 下降之情形(p < 0.05)。
討論
試驗結(jié)束時,中、高劑量組大鼠體重與 陰性對照組相較,呈現(xiàn)顯著減少之情形。體 重改變量方面,中、高劑量組大鼠與陰性對 照組相較,也呈現(xiàn)顯著減少之情形。 試驗期間,喂食高熱量飼料之各組大鼠 其總攝食量雖然明顯低于控制組大鼠,然而 由于其所攝食飼料之熱量較高,因此喂食高 熱量飼料之大鼠其總攝取熱量則顯著高于控 制組。

血清生化安全性評估方面,喂食高熱量 飼料之各組大鼠其血清 AST、ALT、Creatinine、Uric acid、鈉離子、鉀離子及血糖濃 度相較于控制組均無顯著偏高的現(xiàn)象。因此, 推測試驗物質(zhì)低劑量、中劑量、高劑量之下, 并不會造成試驗大鼠出現(xiàn)不良之生理反應(yīng)。 血脂質(zhì)方面,中、高劑量組血清三酸甘 油酯濃度相較于陰性對照組則呈現(xiàn)下降之情 形。大鼠之血清高密度脂蛋白膽固醇濃度, 高劑量與陰性對照組相較,則顯著增加;血 清低密度脂蛋白膽固醇濃度,高劑量與陰性 對照組相較下,皆顯著減少,試驗物質(zhì)可減 少血清低密度脂蛋白膽固醇濃度的產(chǎn)生。 喂食高熱量飼料之陰性對照組大鼠,其 個別內(nèi)臟脂肪量、體脂肪量(內(nèi)臟脂肪量之 加總)及體脂肪率相較正常對照組大鼠均呈 現(xiàn)顯著增加之情形。在個別內(nèi)臟脂肪量方面, 與陰性對照組相較,高劑量組大鼠之附睪周 邊脂肪量、腎臟周邊脂肪量與腸系膜脂肪量 呈現(xiàn)顯著減少之情形。 由表7 整體分析可得知,與陰性對照組 相較,高劑量組大鼠之體重改變量、食物利 用率、體脂肪率、體脂肪量均呈現(xiàn)顯著下降 之情形。高劑量在不易形成體脂肪之功能上, 具有顯著的效果。 本試驗以連續(xù)8 周喂食高熱量飼料之方 式誘導(dǎo)Sprague-Dawley品系大鼠形成肥胖情 形。試驗期間同時投予試驗物質(zhì)「臺糖糖適 康(粉末食品)」,以評估其是否具有不易 形成體脂肪之功能。3 組劑量組試驗物質(zhì)投 予劑量分別為0.21 g/kg0.41 g/kg 0.83 g/ kg。試驗期間,連續(xù)8 周以高熱量飼料喂食 陰性對照組與3 組劑量組大鼠,以誘發(fā)其肥 胖癥狀,同時每日以管喂方式投予試驗物質(zhì) 以評估其是否具有不易形成體脂肪之功能。 試驗結(jié)果顯示:大鼠經(jīng)投予試驗物質(zhì)后,其 體重改變量相較于陰性對照組,于中、高劑 量組呈現(xiàn)顯著降低之情形(p < 0.05),其下降的幅度分別為8.7% 12.1%。體脂肪量分析 結(jié)果顯示,高劑量組大鼠相較于陰性對照組 均呈現(xiàn)顯著降低之情形(p < 0.05),其體脂肪 量減少的幅度達20.8%。血脂質(zhì)方面,中、 高劑量組大鼠之血清三酸甘油酯濃度及膽固 醇濃度與陰性對照組相較,呈現(xiàn)顯著下降之 情形(p < 0.05),血清三酸甘油酯濃度之下降 幅度分別達到15.2% 21.2%;膽固醇濃度 之下降幅度分別達到7.4% 9.6%。高劑量 組之血清游離脂肪酸(FFA)濃度之下降幅度為 21.9%;大鼠之血清高密度脂蛋白膽固醇濃 度(HDL-C),增加的幅度為10.1%;血清低 密度脂蛋白膽固醇濃度(LDL-C),下降的幅 度為23.0%。此外,投予本試驗物質(zhì)對于3 組劑量組大鼠之?dāng)z食量、肝腎功能、血液電 解質(zhì)濃度及血糖之血清生化安全性評估,均 無不良影響。各組大鼠肝臟脂質(zhì)檢測結(jié)果,高劑量組大鼠之肝臟三酸甘油酯濃度下降的 幅度為11.9%;膽固醇濃度下降的幅度為 17.3%。 綜合以上試驗結(jié)果,臺灣糖業(yè)股份有限 公司生物科技事業(yè)部所提供之試驗物質(zhì)「臺 糖糖適康(粉末食品)」,在本試驗條件下, 高劑量組即成人每日攝取量8g具有不易形 成體脂肪之功能。且其所含難消化麥芽糊精、 南瓜萃取物與苦瓜萃取物的各別劑量(數(shù)據(jù)未 揭露)皆有相當(dāng)明顯的差距低于現(xiàn)有文獻報導(dǎo) 之有效劑量【難消化湖精10~34 g/day[17], 南瓜萃取物0.1~0.4 g/kg大鼠( 1~4 g/day 人)[18],苦瓜萃取物0.5~1 g/kg 小鼠( 2.4~4.8 g/day人)[19]】,顯示此三種成分在 不易形成體脂肪功能上可能具有相互協(xié)同效 果(Synergistic effect)。

 



參考文獻

參考文獻
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